4  測(cè)試方法

4.1  方法提要

   本方法采用計(jì)數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

4.2  所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基

    a）浮游菌采樣器；

    b）真空抽氣泵；

    c）培養(yǎng)皿；

    d）培養(yǎng)基；

    e）恒溫培養(yǎng)箱。

4.3  浮游菌采樣器

    浮游菌采樣器宜采用撞擊法機(jī)理的采樣器，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器。

4.3.1  采用的浮游菌采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)器。

4.3.2  狹縫式采樣器的原理

   狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù)。

4.3.3  離心式采樣器的原理

   離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到 的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù)。

4.3.4  狹縫式采樣器的使用要點(diǎn)

    應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進(jìn)行操作。

4.3.4.1  校驗(yàn)

   采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。校驗(yàn)的項(xiàng)目有：定時(shí)器、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速、流量計(jì)。

4.3.2  每次測(cè)試前應(yīng)按說明書上的規(guī)定，先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計(jì)及定時(shí)器。

4.3.4.3 空氣采樣量根據(jù)需要選定。已知采樣器的流量（L/min），設(shè)定采樣時(shí)間（min），兩者相乘即采樣量（L）。

4.3.4.4  注意事項(xiàng)

4.3.4.4.1  采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。

4.3.4.4.2  采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。

4.3.4.4.3  采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測(cè)點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。

4.4  真空抽氣泵

4.4.1  真空抽氣泵的排氣量應(yīng)與采樣器匹配。

4.4.2   宜采用無油真空抽氣泵，必要時(shí)可在非氣口安裝氣體過濾器。

4.4.3  真空抽氣泵安裝的位置必須適當(dāng)，一般裝在采樣器下面。

4.5  培養(yǎng)皿

4.5.1  狹縫式采樣器一般采用? 150mm×15mm、? 90mm×15mm、?65mm×15mm三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

4.5.2  離心式采樣器采用 的固形培養(yǎng)條。

4.6  培養(yǎng)基

    普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。

4.7  恒溫培養(yǎng)箱

    必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。

4.8  測(cè)試步驟

4.8.1  測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

4.8.1.1  采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器宜一直放在被測(cè)房間內(nèi)。

4.8.1.2  用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4.8.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。

4.8.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.8.1.5  采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。

4.8.2  狹縫式采樣器的采樣程序

4.8.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動(dòng)真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。

4.8.2.2  關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。

4.8.2.3  置采樣口于采樣點(diǎn)后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。

4.8.3  培養(yǎng)

4.8.3.1  全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.8.3.2  在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。

4.8.3.3  每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

4.8.4  菌落計(jì)數(shù)

4.8.4.1  用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.8.4.2  若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。

4.8.5  注意事項(xiàng)

4.8.5.1  使用前仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

4.8.5.2  采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對(duì)樣本的污染。

4.8.5.3  對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4.8.5.4 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。